Promocell培養(yǎng)基的配制與準(zhǔn)備:
1.成分添加準(zhǔn)確性
按照產(chǎn)品說明書精確稱量和添加各種成分。例如,對于干粉培養(yǎng)基,要確保每種成分如氨基酸、維生素、無機鹽等都準(zhǔn)確無誤地加入。
注意添加順序,一般先加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基成分,再添加血清、生長因子等添加劑。因為血清中含有多種蛋白和因子,如果添加順序錯誤,可能會引起蛋白沉淀等問題。
2.溶解和混合均勻
將稱量好的成分加入到適量的溶劑(通常是蒸餾水或去離子水)中。對于含有難溶成分的培養(yǎng)基,可能需要加熱或攪拌輔助溶解。
采用適當(dāng)?shù)臄嚢璺绞?,如磁力攪拌或機械攪拌,確保培養(yǎng)基成分完*混合均勻。不均勻的培養(yǎng)基可能導(dǎo)致細(xì)胞在不同位置接受的營養(yǎng)和環(huán)境條件不一致,影響細(xì)胞生長和實驗結(jié)果。
3.過濾除菌
配制好的培養(yǎng)基必須進行過濾除菌,通常使用0.22μm的濾膜。這是為了保證培養(yǎng)基中沒有細(xì)菌、真菌等微生物污染,為細(xì)胞提供一個無菌的生長環(huán)境。
過濾時要確保濾膜的完整性,防止濾膜破損導(dǎo)致除菌失敗??梢圆捎谜婵者^濾裝置或正壓過濾裝置,并且要注意過濾裝置的無菌操作,避免二次污染。
Promocell培養(yǎng)基的儲存和使用:
1.儲存條件
未使用的培養(yǎng)基應(yīng)儲存在2-8℃的冰箱中,避免冷凍,因為冷凍可能會破壞培養(yǎng)基中的一些成分,如血清中的蛋白等。
注意避光保存,特別是含有光敏感成分的培養(yǎng)基。有些成分在光照下可能會發(fā)生分解或變性,影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。
2.預(yù)熱
在使用前,應(yīng)將培養(yǎng)基預(yù)熱到37℃左右,這是因為細(xì)胞培養(yǎng)通常在37℃的恒溫環(huán)境下進行。可以將培養(yǎng)基放置在水浴鍋中預(yù)熱,但要注意防止水浴鍋的水進入培養(yǎng)基造成污染。
3.使用時效
配制好的培養(yǎng)基一般有一定的使用期限。例如,添加了血清的培養(yǎng)基在4℃下保存不宜超過一個月,最好在兩周內(nèi)使用。因為隨著時間的推移,培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分會逐漸降解,血清中的活性成分也會失活,而且長時間保存會增加微生物污染的風(fēng)險。
4.細(xì)胞接種密度
在接種細(xì)胞時,要根據(jù)細(xì)胞類型和實驗?zāi)康目刂坪线m的接種密度。如果接種密度過高,細(xì)胞會因為營養(yǎng)物質(zhì)競爭和空間限制而生長不良;接種密度過低,則可能無法達(dá)到實驗所需的細(xì)胞數(shù)量。例如,對于貼壁細(xì)胞,一般每平方厘米接種1-10?個細(xì)胞比較合適,但具體數(shù)值因細(xì)胞種類而異。
